微量分光光度计原理及应用

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微量分光光度计原理及应用


   微量分光光度计能够快速准确的定量检测核酸、蛋白质等溶液。具有使用方便、消耗样品少(仅2μl)、不用预热、能迅速清理残留样品、不需要比色皿或其它样品定位装置、样品不需要稀释等特点,常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量,目前已成为众多实验室的常规仪器。


  工作原理

  超微量分光光度计进行浓度测定的原理是根据朗伯-比尔(Lamber-Beer)定律,

A=K·C·L

   式中,A为吸光度;K为吸(消)光系数;C为溶液的浓度;L为液层厚度。此公式说明:在入射光一定时,溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度成正比。此式就是光的吸收定律的数学表达式,又叫朗伯-比尔定律。


  核酸定量

  核酸的定量是超微量分光光度计使用频率最高的功能。可以定量测定溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA以及RNA含量。这是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波长在260nm,吸收波谷在230nm。

  除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1。8(DNA)或者2。0(RNA)。如果比值低于1。8 或者2。0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2。0。


  蛋白质直接定量

  这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。


  比色法蛋白质定量

  蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。

  比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等几种方法。(具体内容可参考本官网“常用蛋白质浓度测定方法汇总”) 


Nano系列微量分光光度计


Nano-100微量分光光度计Nano-200微量分光光度计  Nano-300微量分光光度计

Nano-100          Nano-200         Nano-300 


  产品特点

l 操作界面直观易用,数据准确,重复性高

l 两种量程,高低浓度均可精确测量

l 每次检测仅需0.5μl~2ul样品,无需稀释,直接测量

l 5s即可完成检测,氙闪光灯,寿命长达10年

l 单机操作,方便快捷(Nano-200,Nano-300)

l Nano-300新增比色皿模式,菌液浓度直接测量



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